产品货号：
JN0070
中文名称：
Klenow片段
英文名称：
Klenow Fragment
产品规格：
150U|750U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是利用基因工程技术表达大肠杆菌DNA聚合酶I大片段，并经过多次纯化分离而得到的。该酶只具有5'→3'的DNA聚合酶活性和3'→5'的外切核酸酶活性，不具有DNA聚合酶I的5'→3'外切核酸酶活性。
- 双链DNA 5'突出末端的补平；
- 双链DNA 3'突出末端的削平；
- 双链DNA 3'-末端的标记；
- 双脱氧法DNA序列测定（Sanger法）；
- 使用随机引物进行DNA标记；
- cDNA第二链的合成或定点突变反应第二链的合成。
在37℃条件下，30分钟内能使10nmol的dNTPs渗入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。
| 组分 | 150U | 750U |
| Klenow Fragment（5U/μl） | 30μL | 30μL×5 |
| 10×Klenow Reaction Buffer | 1mL | 1mL×5 |
保存：-20℃
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
- 使用时将酶置于冰上操作，使用完毕后-20℃保存。
- 操作时动作要轻柔，剧烈搅拌会使酶失去活性。
- 由于不具有5'→3'外切核酸酶活性，因此不具有切口平移活性。
- 由于同DNA有较强的亲和性，过量使用酶，会由于凝集作用而抑制反应进行。
- 金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐，大剂量的无机磷酸盐对酶有抑制作用。
双链DNA 5'突出末端的补平：
- 试剂融化后，在冰上配制如下反应体系：
成分 用量 模板DNA 0.1～4μg 10×Klenow Reaction Buffer 5μL dNTPs(10mM) 0.1μL Klenow Fragment 0.2～1μL ddH2O 至20μL - 将反应液轻轻混匀，并瞬时离心。
- 37℃孵育10分钟。
- 75℃孵育20分钟，终止反应。
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